ОЦЕНКА РАЗВИТИЯ ЗАРОДЫШЕЙ ПРИ ЗАКЛАДКЕ ИКРЫ НА ИНКУБАЦИЮ И В ПРОЦЕССЕ ИНКУБАЦИИ

Привезенная на рыбоводный завод икра подвергается обязательному об- следованию на степень ее оплодотворения, а также оценивается стадия или этап ее эмбрионального развития.

В чашку Петри из каждой привезенной на завод партии аккуратно вместе с водой помещают не менее 100 икринок. Затем заполненную чашку Петри немед- ленно ставят на ровную поверхность, покрытую черной тканью. Использование такой ткани позволяет лучше осмотреть икринки на наличие в них зародышевого бугорка (диска). Он принимает форму, близкую к полушарию. Его контур четко очерчивается. По А. И. Смирнову (1975), диаметр сформировавшегося зароды- шевого диска у осенней кеты варьирует в пределах 0,9–1,0 мм. При наличии в пробе побелевших икринок, т. е. с коагулированным белком, а также икринок, где зародышевый диск не просматривается, их выбраковывают. Например, в пробе из

отобранных 100 икринок были обнаружены 3 икринки с характерными для неопло- дотворенной икры признаками. Значит, в обследуемой партии 97% икринок были оплодотворены и 3% не оплодотворены или погибли в процессе транспортировки на завод.

Но наиболее точным способом оценки количества неоплодотворенных и по- гибших икринок в период транспортировки является их визуальный осмотр в освет- ляющем растворе.

В 1 л воды необходимо растворить 7 г поваренной соли мелкого помола и 50 мл 70%-й уксусной эссенции. В этот раствор по вышеописанному примеру помеща- ют 100 икринок. Через 10–15 мин присутствующие в пробе побелевшие икринки станут прозрачными, как живые, но в этом случае необходимо просмотреть их на наличие зародышевого диска.

Такой же раствор следует использовать при обследовании икринок в течение всего периода инкубации.

Для достижения более точной и объективной оценки количества оплодотво- ренных икринок, стадий развития зародышей как при приемке икры на завод, так и в течение ее инкубации необходимо дополнительно использовать метод ее при- жизненного обследования с помощью оптических приборов, например бинокуляра МБС-10 или новейшего из оптических приборов ZEISS-STEMI DV 4 (8?32) (рис. 32).

МБС-10 ZEISS-STEMI DV 4 (8?32)

Рис. 32. Оптические приборы

Зародышей рассматривают прижизненно, не вскрывая оболочку икринки. Пе- ред этим икру мягко перекатывают между пальцами, пока ее оболочка не станет прозрачной и зародыш не будет видимым под микроскопом (бинокуляром). Пред- варительного фиксирования икры в каком-либо фиксирующем растворе не требу- ется. Определение этапа и стадии развития зародышей должно осуществляться не менее чем на 10 икринках. Икринки рассматривают при разных уровнях осве- щения – при падающем (проходящем) или смешанном освещении.

В ранний инкубационный период (до 20–25 сут) в целях контроля за развитием зародышей, а также в случае закладки на завод отдельных партий икры по ка- ким-либо причинам в непредусмотренные сроки (например, при задержке сроков поступления на завод более чем на 8 ч от начала ее оплодотворения), кроме при-

31

жизненного обследования, используют способ определения этапов и стадий раз- вития зародышей у эмбрионов, зафиксированных в 4%-м растворе формалина. Этот способ позволяет выявить этап и стадию развития зародышей при содержа- нии икры на заводе на конкретный момент или этап и стадию развития зародышей при закладке икры в инкубаторы. Однако осматривать зародышей (из числа не менее 10 икринок) следует только после окончательной фиксации (затвердения) икринок, обычно на следующие сутки после фиксации. Перед началом этих работ икринки в целях безопасности здоровья (из-за токсичности формалина) необходи- мо промыть в течение 30–40 мин в проточной воде и только после этого присту- пать к обследованию зародышей.

Под объективом бинокуляра сначала на малом увеличении при помощи двух препаровальных игл аккуратно, стараясь не повредить зародыш, полностью сни- мают оболочку. Скальпелем отрезают участок икринки с зародышем или сам за- родыш и приступают к осмотру.

На рис. 33 и 34 показаны ранние и поздние стадии эмбрионального развития тихоокеанских лососей на примере осенней кеты, что позволит более точно опре- делить стадию их эмбрионального развития. Подробное описание постадийного и поэтапного эмбрионального развития отдельных видов тихоокеанских лососей (кеты, горбуши, кижуча и нерки) дано в монографии А. И. Смирнова (1975).

Приведем пример описания отдельных этапов и стадий развития зародышей лососей на определенные даты обследования.

Для выполнения этой работы использовалась икра нерки, полученная 26 ав- густа 2010 г. «сухим» способом оплодотворения и заложенная на инкубацию в проточную емкость, установленную на участке литорали оз. Киси. Развитие за- родышей проходило при температуре воды от 13 до 16,4°С и содержании в ней кислорода 7,4–9,2 мг/л. Через 24 и 47 ч с момента оплодотворения икры 27 и 28 августа соответственно были отобраны и зафиксированы в 4%-м растворе фор- малина ее пробы – по 10 икринок. В дальнейшем в камеральных условиях из из- готовленных препаратов были сделаны фотоснимки.

По итогам биометрических измерений установлено, что размер (диаметр) и мас- са оплодотворенных икринок нерки в среднем составляют 5,48 мм и 102 мг соответ- ственно (табл. 1). Пределы варьирования размеров икринок относительно невысо- кие – 5–6 мм, а диапазон варьирования их массы более широк – от 92,2 до 104,3 мг.

Таблица 1. Биометрические показатели оплодотворенной икры нерки, происхождение оз. Киси, 2010 г.

Размер (диаметр), мм Масса, мг

5,48±0,11 5,0–6,0

По истечении первых суток наблюдений за развитием зародышей нерки их возраст составил 24 ч / 14,7 градусо-дней. Зародыши находились на 2-м этапе эмбрионального развития (на этапе дробления зародышевого диска). На рис. 35 показана крупноклеточная морула. Контуры морулы четкие, в плане она имеет по-

102,0±1,3 92,2–104,3

лусферическую форму диаметром 1,0–1,1 мм. Нижележащие бластомеры распо- ложены не так плотно, как в поверхностном слое. К исходу первых суток в моруле насчитывалось 60–84 бластомера.

Рис. 33. Ранние стадии развития осенней кеты: А – икринка после набухания, вид сверху; заметно темное микропилярное поле; левее через оболочку просвечивается зародышевый диск; Б – живая икринка сбоку на стадии двух бластомеров в проходящем свете; В – зародышевый диск на стадии бластомерной бластулы; Г – икринка на стадии появления «краевого узелка»; Д – стадия «краевого узел- ка» (дифференцировка зародышевых пластов и хорды), вид сверху в проходящем свете; Е – участок зародышевого диска на стадии образования переднего конца зародыша; Ж–М – стадии дробления зародышевого диска, вид сверху. Рисунки А–Е по Н. Н. Дислеру (1957), рисунки Ж–М по А. И. Смирнову (1975)

В конце вторых суток при возрасте зародышей 47 ч / 28,9 градусо-дней на- блюдали следующий, 3-й этап эмбрионального развития (этап бластулы) (рис. 36). Клетки бластулы не просматривались. Бластула приняла плоскую дискообразную форму (бластодиск) размером 1,5–1,7 мм и располагалась в зоне мелких жировых капель икринок.

Рис. 34. Стадии начала сегментации мезодермы и формирования головы и туловища зародыша осенней кеты: А – зародыш на стадии 3 сегментов, снятый с фиксированной икринки, вид сверху; Б – стадия 7 сегментов; В – стадия 13 сегментов; Г – зародыш на стадии 30–31 сегмента, вид сбоку (как и на следующих рисунках); Д – стадия 46–47 сегментов; Е – стадия 58 сегментов (по Н. Н. Дислеру, 1957)

а б

в г

д Рис. 35. Зародыши нерки на 2-м этапе эмбриогенеза (этапе дробления зародышевого диска), стадия – крупноклеточная морула, 60–84 бластомера, 24 ч от оплодотворения, температура воды 13–16,4oС: а – фрагмент икринки с зародышевым бугорком и оболочка икринки, увеличение 20?2; б – вид сбоку, четко просматриваемый зародышевый бугорок, увеличение 20?2; в – вид сверху, увеличение 20?3; г – вид сверху, подсушенный фрагмент икринки, увеличение 20?3; д – вид сверху, подсушенный фрагмент икринки, увеличение 20?4

а б Рис. 36. Зародыши нерки на 3-м этапе развития – бластула: а – общий вид икры с просматриваемым бластодиском, увеличение 20?1; б – расположение бластодиска на участке мелких жировых капель, увеличение 20?4

В лаборатории рыбоводного завода в целях практического обучения молодых специалистов следует создать банк препаратов (фрагментов икринок, зародышей, содержащихся во флаконах из-под пенициллина, заполненных 4%-м раствором формалина) с указанием на каждой маркировке вида рыбы, этапа и стадии разви- тия зародыша, температуры воды, возраста зародышей, выраженного в градусо- днях или градусо-часах).