2 Район работ, материал и методы
В основу работы положены материалы исследований, проведенные с 1990
по 2012 г. на ЛРЗ Курильский и Рейдовый, расположенных на острове Итуруп
Курильской гряды и ЛРЗ Лесной – в Корсаковском районе Сахалинской обла-
сти. Места расположения предприятий представлены на рис. 5а и 5б.
Рис. 5. Район проведения исследований:
а) Лесной ЛРЗ ; б) Рейдовый и Курильский ЛРЗ
В качестве объектов исследований использованы горбуша (Oncorhynchus
gorbusсha Wallbaum, 1869) и кета (O. keta Wallbaum, 1869) на разных этапах он-
тогенеза (эмбрионы, предличинки, личинки, молодь и половозрелые особи) в
условиях искусственного воспроизводства.
Измерение параметров среды во время прохождения стадий онтогенеза
горбуши и кеты проводили в условиях производственных предприятий. Тем-
пературу воды измеряли три раза в день: в 9:00, 14:00 и в 18:00, отдельно для
каждого из видов, используя термометр ртутный стеклянный лабораторный
TL (всего обработано 106 380 измерений). Содержание растворенного кисло-
рода контролировали три раза в день (используя термооксиметр) в период вы-
держивания производителей в садках, и при выращивании молоди, а также
ежедекадно в процессе инкубации, выдерживания предличинок и подращива-
ния личинок (всего обработано 61 776 показаний). Расход воды в период инку-
бации икры, выдерживания предличинок и подращивания личинок измеряли
ежедекадно, во время выдерживания производителей горбуши и кеты в садках
и выращивания их молоди – два раза в день. Расход воды в единицу времени в
инкубационных аппаратах и питомных каналах определяли расчетным мето-
дом, на основании пропускной способности водоподающих труб, снабженных
шаровыми кранами (всего обработано 41 976 данных).
При непосредственном участии одного из авторов был собран материал в
период с 1994 по 1999 год на ЛРЗ Рейдовом, с 2009 по 2012 год – на ЛРЗ Лесном,
с 2009 по 2013 гг. – работая в СахГУ.
Градусодни (гр/дн) считали, как сумму тепла, накопленную организмами за
время развития.
Для измерения абиотических параметров среды применяли следующее
оборудование:
• для измерения температуры воды применяли термометр ртутный сте-
клянный лабораторный TL в оправе Фусса (от 0 до 50 °С, цена деления 0,1 °С);
максимальная глубина измерения – 5 м. Измерение проводили следующим об-
разом: термометр опускали в воду, 2–3 раза воду набирали в стакан и сливали.
После этого термометр опускали в вертикальном положении в воду на 5 ми-
нут, поднимали до уровня глаз и по шкале определяли температуру воды;
• термооксиметр «Horyba» японского производства, с цифровым жидко-
кристаллическим индикатором, предназначенным для оперативного изме-
рения содержания растворенного кислорода и температуры воды непосред-
ственно в водоеме. Технические характеристики термооксиметра приведены
в приложении.
Биологический анализ производителей и молоди выполняли по стандартной
методике измерения лососевых рыб [117]. Во время биологического анализа со-
бирали отолиты, согласно «Методике массового маркирования отолитов» [1; 161].
Для определения количества икринок в навеске взвешивали обе гонады, за-
тем из середины одной из них брали навеску в 20 г для горбуши и 50 г для кеты
и просчитывали в ней количество икринок. После этого пересчитывали коли-
чество икринок на всю массу гонад и, тем самым, рассчитывали величину аб-
солютной плодовитости самки лососей в конкретное время хода. После опреде-
ления плодовитости 50-ти самок определяли среднюю плодовитость на момент
отбора пробы. Для определения популяционной плодовитости, определение
индивидуальной производили трижды во время нерестового хода: в начале, се-
редине и конце. Полученные значения соотносили на долю особей в каждом из
подходов и тем самым получали средневзвешенное значение плодовитости, ко-
торое, в большинстве случаев, можно принять за популяционную плодовитость.
Рабочую плодовитость определяли во время сбора половых продуктов. Ее
значение равно абсолютной за вычетом икринок невыметанных или недозрев-
ших, оставшихся в брюшной полости.
Возраст производителей кеты определяли по чешуе. Пробы чешуи для
определения возраста брали во втором-третьем ряду выше боковой линии за
вертикалью, проходящей сзади спинного плавника.
Биологический анализ икры выполняли по следующей схеме: набирали 100
икринок одной партии из разных инкубационных аппаратов в чашку Петри,
обязательно закрывая крышкой во избежание высыхания. Биологический ана-
лиз икры проводили на 3-х стадиях развития:
– оплодотворенной икры;
– после набухания;
– перед выклевом.
Количество икринок в каждой пробе – не менее 100 штук. Пробы брали от-
дельно из первой, средней и последней партий сбора в течение всего периода
наблюдений. Анализ включал в себя: А/Д икры – диаметр икринки в мм; Б/Р
икры – вес икринки в мг.
Диаметр икринки определяли с помощью окуляр – микрометра МБС -9 или
«методом средних». На миллиметровую металлическую линейку укладыва-
ли плотный ряд из 10 икринок и определяли их суммарный диаметр (рис. 6).
Среднее значение из суммарных диаметров 10 икринок дает размер диаметра
икринки в пробе.
Рис. 6. Измерение диаметра икры лососей с применением мерной линейки
Вес икры определяли как средне взвешенную величину из 100 икринок.
Взвешивание производили на электронных весах «Sartorius». Данные заносили
в журнал биологических анализов икры, где указывали вид рыбы, дату анали-
за, место взятия пробы (№ аппарата), номер партии, количество градусодней.
Биологический анализ свободных эмбрионов и личинок. Частота проведения
анализа – 1 раз в месяц. Количество эмбрионов в пробе 100 штук. Пробы бра-
ли от первой, средней и последней партий сборов, причем от одних и тех же
в течение всего рыбоводного цикла. Пробу отбирали в различных местах пи-
томного канала. Свободных эмбрионов и личинок фиксировали следующим
образом: пробу помещали в стакан с 4 % раствором формалина на 15–20 ми-
нут, после чего личинок промывали в чистой воде, обсушивали в марлевой
салфетке и сразу производили промеры и взвешивание. При длительном вы-
держивании пробы в формалине может наблюдаться искажение весовых дан-
ных, по этой причине пробы фиксировали не более 15–20 минут. Перед из-
мерениями свободного эмбриона и личинку расправляли, так как в растворе
формалина форма тела может деформироваться. Определяли следующие па-
раметры свободных эмбрионов (рис. 7) и личинок: длина АС в мм, длина АД в
мм, общий вес в мг и вес желточного мешка в мг. Весовые показатели опреде-
ляли на электронных весах «Sartorius» с точностью до 1 мг.
Рис. 7. Измерение длины свободного эмбриона кеты
Желточный мешок перед взвешиванием отделяли от личинки с помощью
препаровальной иглы или скальпеля. Работу по отделению желточного мешка
проводили очень внимательно, тщательно отделяя желточный мешок от кож-
ного покрова и внутренних органов, так как этот показатель является наибо-
лее важным при оценке степени развития свободных эмбрионов и личинок.
Средний вес личинок и желточного мешка получали путем деления суммы
весовых показателей на количество рыб в пробе [87].
По результатам осредненных данных вычисляли следующие показатели:
– запас желточного мешка в % от первоначального веса; определяли по фор-
муле: Вес желточного мешка (Р ж. м.)(на отчетную дату) ? 100 % / Вес желточ-
ного мешка (Р1 ж. м.) (первоначальный);
– резорбция желточного мешка в мг за отчетный месяц – показывает какое
количество желтка израсходовано за отчетный месяц; определяли по формуле:
Р ж. м. в предыдущий месяц минус Р ж. м., полученный по анализу месячной
резорбции желточного мешка в мг;
– доля желточного мешка от общего веса личинки (%) – вычисляли за весь
период развития 2 раза – после выклева и на момент поднятия на плав. Этот
показатель использовали для оценки влияния абиотических факторов на ход
развития лососей и для накопления биостатистического материала.
Отклонения от оптимума считали в относительных величинах (? от средне-
месячных оптимальных значений температуры на каждом этапе онтогенеза).
Обработку и анализ данных осуществляли в программах Microsoft Office
Excel и R-Statistica. Для построения картосхем расположения рыбоводных за-
водов использованы космоснимки Google Earth.