Приложение 18 - Рекомендации по проведению гематологических исследований радужной форели

1. Исследование клеток крови

Подготовка материала для исследования. Для исследования клеток крови рыб и ге- матологических параметров их используются окрашенные мазки крови и цельная кровь, а для проведения биохимических исследований – сыворотка крови.

Забор крови для проведения гематологических и биохимических исследований. Су- ществует несколько способов взятия крови у рыб:

• из хвостовой вены;

• хвостовой культи;

• сердца;

• жаберных вен.

1.1. Взятие крови из хвостовой вены

При взятии крови из хвостовой вены место пункции находится в точке, образован- ной при условном пересечении средней линии и линии, идущей перпендикулярно от анального отверстия у сеголетков и от заднего края анального плавника у рыб старшего возраста для карповых и форели (рис. 1). у осетровых место пункции находится на брюшной стороне по средней линии позади анального отверстия.

Рис. 1. Схема пункции у радужной форели

При взятии крови отловленную рыбу следует обернуть стерильной салфеткой, место пункции обработать антисептиком. Размер иглы подбирают в зависимости от размера рыбы.

После того как проколота кожа и игла вошла в мышцы, следует потянуть поршень шприца для создания разрежения в нем. Удерживая шприц таким образом (рис. 2), необ- ходимо медленно продвигать иглу по направлению к позвоночнику рыбы. При попада- нии иглы в вену в канюле шприца появится кровь. После пункции вены следует взять необходимое количество крови, затем иглу извлечь, место пункции обработать антисеп- тиком, рыбу отпустить.

 

Рис. 2. Забор крови из хвостовой вены у стерляди (слева) и радужной форели (справа)

1.2. Забор крови из хвостовой культи

При взятии крови из культи хвоста срезают спинной и анальный плавники, удаляют чешую, слизь, протирают кожу спиртом, затем отсекают хвостовой стебель по медиаль- ной линии позади анального плавника и собирают кровь в стерильную посуду (рис. 3).

Рис. 3. Забор крови из хвостовой культи

1.3. Взятие крови из сердца

При взятии крови из сердца место укола находится в середине отрезка, соединяюще- го основание грудных плавников, у форели и чуть выше этой точки у карповых рыб (рис. 4). Иглу вводят в место укола под углом 45° относительно фронтальной плоскости (рис. 5).

Рис. 4. Место пункции при взятии крови из сердца у форели

Рис. 5. Взятие крови из сердца у форели

1.4. Взятие крови из жаберных вен

При взятии крови из жаберных вен удаляют жаберную крышку и вводят инъекцион- ную иглу в вену у основания одной из жаберных дуг (рис. 6).

Рис. 6. Взятие крови из жаберной вены

1.5. Приготовление мазков крови

После того как капля крови помещена на предметное стекло (рис. 7), ее следует рас- пределить по всей поверхности предметного стекла с помощью шлифованного стекла.

Рис. 7. Помещение капли крови на предметное стекло

Для этого шлифованным концом стекла нужно коснуться капли крови под углом 45o, подождать, пока она полностью распределится по всей кромке. После этого быстрым легким движением провести кромкой шлифованного стекла по всей поверхности предметного стекла (рис. 8, а). Затем мазок необходимо просушить на воздухе в течение 5–10 мин (рис. 8, б).

Рис. 8. Приготовление мазка крови

Качественный мазок должен быть ровным. Капля крови должна быть равномерно распределена по всей длине мазка (рис. 9).

Рис. 9. Качественный (слева) и некачественный (справа) мазки

Далее высушенный мазок необходимо погрузить в фиксирующую жидкость на 20–30 мин. В качестве фиксатора применяется метиловый или этиловый спирт (96o).

После этого мазок окрашивается. Окрашивается он по одному из приведенных ме- тодов: окраска по Романовскому, по Паппенгейму, по Паппенгейму – Крюкову, по Ро- мановскому – Гимзе, по Маю – Грюнвальду.

Окраска по Романовскому. Принцип. Окрашивание различных элементов клеток в разные цвета и оттенки сме- сью основных (азур II) и кислых (водорастворимый желтый эозин) красок.

Оборудование: колба или бутыль вместимостью 1 л, измерительные цилиндры вме- стимостью 250 мл, цилиндры для разведения красок вместимостью 100 мл, градуиро- ванная пипетка, штатив для мазков, кювета со стеклянным мостиком для окраски.

Реактивы. В продаже имеется готовый раствор краски Романовского, а также сухая краска Романовского (Гимзы), из которой приготавливают раствор следующим образом: 3,8 г сухой краски Романовского растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта (последний хуже). Раствор оставляют на 3–5 сут, часто взбалтывая для лучшего растворения краски. Затем прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3–5 сут, периодически взбалтывая. Приготовленная таким образом краска хорошо со- храняется длительное время в темных бутылях в шкафу, где нет ни кислот, ни щелочей.

Готовый или приготовленный раствор красителя Романовского перед употреблени- ем оттитровывают, т. е. окрашивают несколько фиксированных мазков крови в течение 25–40 мин различно разведенной краской (1–2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды). По хорошо окрашенному препарату устанавливают нужное количество капель краски на 1 мл воды и время окрашивания.

Методика. Фиксированные мазки укладывают на мостик, состоящий из двух стек- лянных палочек, уложенных на два противоположных края кюветы.

Затем мазки заливают разведенной краской, которую наливают на мазок возможно более высоким слоем. Окрашивание длится в зависимости от температуры воздуха в помещении от 25 до 45 мин.

Если температура в помещении низкая или требуется быстрее окрасить мазки, то разведенную краску можно подогреть до 60–70 °С (до кипения доводить нельзя).

После окончания окраски краску смывают (но не сливают) сильной струей воды и ставят мазки вертикально в деревянный штатив для просушивания.

Разведенной краской можно пользоваться только в течение одного дня. Окраска по Паппенгейму – Крюкову. Принцип. Комбинированная окраска фиксатором-красителем Мая – Грюнвальда и краской Романовского, дающая возможность очень хорошо дифференцировать состав- ные части клеток.

Оборудование: см. «Окраска по Романовскому». Реактивы: 1) готовый краситель-фиксатор Мая – Грюнвальда, состоящий из эозина-метилено- вого синего в метиловом спирте;

2) свежеприготовленный раствор краски Романовского (1–2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды);

3) нейтральная дистиллированная вода. При отсутствии готового красителя-фиксатора Мая – Грюнвальда его можно приго- товить растворением 0,3–0,5 г сухой краски Мая – Грюнвальда в 100 мл чистого метило- вого спирта с добавлением (или без него) 50 мл чистого глицерина.

Краситель в обоих случаях созревает четыре дня при комнатной температуре. Методика. На нефиксированный мазок наливают пипеткой 10–15 капель готового красителя-фиксатора Мая – Грюнвальда, через 3 мин прибавляют по каплям столько же воды и продолжают окрашивание еще 1 мин, после чего краситель смывают водой и мазок высушивают на воздухе.

Затем на высушенный мазок наливают свежеприготовленный водный раствор кра- сителя Романовского на 8–15 мин в зависимости от температуры в помещении, смывают краску водой и мазок высушивают на воздухе. Этот способ окраски является наилуч- шим.

Окраска по Романовскому – Гимзе. Для окрашивания используется готовый рас- твор краски.

Перед употреблением краска разводится из расчета 1–2 капли на 1 мл дистиллиро- ванной воды.

Методика. Зафиксированный препарат помещают мазком вверх на стеклянные па- лочки над чашкой и покрывают поверхность мазка высоким слоем разведенной краски. Окрашивание можно производить также в кюветах, наполненных раствором краски. Продолжительность окрашивания 15–30 мин; для свежих мазков и в сухую жаркую по- году времени требуется меньше, чем при окраске старых мазков или при окраске в сы- рую и холодную погоду. По истечении определенного времени краску смывают, лучше дистиллированной водой, мазок для высушивания ставят вертикально на пропускную бумагу. Высушивание мазка можно производить подогреванием на руке.

При окрашивании по методу Романовского – Гимзы необходимо соблюдать ряд условий, чтобы получить правильную окраску:

1) вода должна иметь рН 6,6–6,8; 2) посуда, в которой разводится краска, должна быть чистой; 3) раствор краски готовится extempore, перед окраской, а не заранее, так как наилучшее окрашивание получается в момент разбавления алкогольного раствора во- дой;

4) краску следует добавлять в воду по каплям, а не наливать сразу; 5) концентрация раствора не должна превышать три капли на 1 мл; 6) для получения красивой дифференциальной окраски рекомендуется оставлять ди- стиллированную воду на мазке после промывки в течение 1 мин.

Правильная окраска определяется по внешнему виду. Макроскопически мазок дол- жен быть окрашен в розоватый цвет с незначительным фиолетовым оттенком. Серые или серо-голубые мазки указывают на избыток щелочи, ярко-красные – на избыток кис- лоты или слишком кратковременное окрашивание.

Метод Романовского – Гимзы особенно хорош при окрашивании мазков на наличие кровепаразитов, а также при окрашивании одновременно нескольких мазков.

Модификация окраски мазков крови краской Романовского – Гимзы по Филипсо- ну. Для окрашивания по этому методу требуется особое приготовление краски, которое можно производить заранее, но можно и в момент окрашивания. Берется одна часть жидкой краски Романовского и три части этилового спирта (ректификата). После сме- шивания со спиртом краска сразу же пригодна для употребления.

Методика. На нефиксированный мазок крови наносится 10–15 капель приготовлен- ной вышеуказанным способом краски. Через 10–15 минут, необходимых для фиксации мазка, наливается примерно 0,5–1 мл дистиллированной воды, которая тщательно сме- шивается с краской. Окрашивание мазка продолжается в течение 20–30 мин (длитель- ность периода окрашивания изменяется в зависимости от температуры воздуха, качества краски и некоторых других причин и может быть установлена в каждой лаборатории самостоятельно). Затем краска смывается дистиллированной водой и мазок высушивает- ся. Высохший мазок годен для исследования.

Окраска по Маю – Грюнвальду. Окрашивание производится готовым раствором краски Мая – Грюнвальда.

Методика. На нефиксированный мазок крови наносят 15–20 капель краски и остав- ляют на нем в течение 3 мин. По истечении указанного времени на мазок наслаивают такое же количество капель дистиллированной воды (15–20 капель). Краску хорошо перемешивают с водой с помощью стеклянной палочки и докрашивают препарат еще 10–15 мин. Далее промывают его дистиллированной водой и высушивают.

Окраска по Паппенгейму. В этом методе соединяются преимущества окраски по Маю – Грюнвальду и Романовскому – Гимзе. Окраска является комбинированной, суть ее заключается в том, что мазок вначале окрашивается по методу Мая – Грюнвальда, а затем докрашивается по методу Романовского – Гимзы.

Методика. На нефиксированный мазок крови наносят 15–20 капель краски Мая – Грюнвальда и выдерживают в течение 3 мин. Далее к краске добавляют такое же коли- чество дистиллированной воды и после перемешивания оставляют еще на 3 мин. Затем краску сливают, стекло ставят краем на пропускную бумагу, чтобы стекла вода. После этого на невысохший еще мазок наслаивают свежеприготовленную краску Романовского – Гимзы (15–20 капель краски на 10 мл воды) и мазок докрашивают дополнительно 15–30 мин, в зависимости от давности его. По истечении указанного времени краску смывают и мазок высушивают. Если мазки окрашиваются интенсивно, их можно разба- вить дистиллированной водой, выдержать в течение 1 мин, а затем высушить.

Исследование окрашенных мазков крови проводится с применением микроскопов с иммерсионной системой.

1.6. Подсчет элементов красной крови

Преобладающей клеточной формой крови рыб являются эритроциты. Зрелые клетки красной крови эллипсоидной формы, имеют диаметр 5×15 мкм (4,5×7,0–12,0×18,0). В центре расположено несколько вытянутое ядро темно-фиолетового цвета. Цитоплазма этих клеток, благодаря наличию гемоглобина, оксифильная, розовато-желтого цвета.

Зрелые эритроциты здоровых рыб всегда одинаковы по величине. Разнообразие раз- меров (анизоцитоз) является признаком патологии. В то же время пойкилоцитоз – от- клонение формы эритроцитов от нормы, если он не носит массового характера, не всегда свидетельствует о патологии: эритроциты в процессе движения вращаются вокруг ко- роткой и длинной своих осей, сталкиваются, деформируясь, несколько изменяя форму.

При оценке эритропоэза определяется процентный состав незрелых эритроцитов. Цитоплазма их окрашена более базофильно, ядра значительно светлее, рыхлые, круп- ные. Чем клетка менее зрелая, тем базофильнее ее цитоплазма, тем светлее, крупнее и рыхлее ядро. Совсем молодые эритроциты округлы, ядра у них большие и круглые.

Методика подсчета незрелых эритроцитов следующая: подсчитывается по всему мазку (в различных его участках) 500 эритроцитов, и среди них отмечается количество незрелых форм, которое выражается в процентах, где за 100 % принимается общее ко- личество подсчитанных на мазке эритроцитов.

1.7. Подсчет элементов белой крови

Лейкоцитарную формулу определяют, подсчитывая в окрашенных мазках крови рыб 200 лейкоцитов, и выражают в виде процентного соотношения отдельных видов лейко- цитов. Ввиду того что более крупные формы клеток (моноциты, нейтрофилы, миелобла- сты) располагаются больше по периферии, вдоль наружных краев мазка, а более мелкие (лимфоциты, микромиелобласты) находятся ближе к центру, клетки подсчитывают все- гда по одной и той же определенной системе: половину клеток считают на одном конце мазка по зигзагообразной линии, другую половину – на другом конце, по этому же принципу.

Лучше двигаться по самым тонким, наиболее прозрачным местам мазка, в которых хорошо просматривается структура клеток. Особенно важно придерживаться указанного правила подсчета при патологических изменениях крови, выявить которые при этом будет значительно легче.

Процентное соотношение клеток белой крови подсчитывается с помощью 11-кла- вишного счетчика для лейкоформулы. Изучая белые клетки, учитывают сдвиги ядер нейтрофилов – индекс сдвига ядер.

Повышение процента незрелых нейтрофильных клеток в периферической крови называется сдвигом влево. Снижение количества палочкоядерных нейтрофилов и при- сутствие нейтрофилов с гиперсегментированными ядрами определяется как сдвиг вправо.

Для выяснения отклонения в гематологических параметрах применяется показатель индекса сдвига лейкоцитов (ИСЛ). Индекс сдвига лейкоцитов рассчитывается как отно- шение числа гранулоцитов к сегментоядерным нейтрофилам. У здоровых осетров он составляет 0,25–0,40, у карпов – 0,30.

1.8. Определение гемоглобина по Сали

Оборудование: гемометр Сали (ГС-3); капилляр с отметкой 0,02 мл. Реактивы: 0,1 N раствор соляной кислоты (8,2 мл HCl удельным весом 1,19 на 1 л дистиллированной воды), дистиллированная вода.

Методика определения: Среднюю пробирку гемометра наполняют до нижней от- метки 0,1 N раствором соляной кислоты. Набирают кровь в капилляр до метки (0,02 мл), не допуская попадания пузырьков воздуха, и удаляют ее излишек путем прикладывания фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдувают кровь на дно пробирки таким образом, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают ее соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по ее дну. Точно через 5 мин добавляют по каплям дистиллированную воду, жидкость перемешивают стеклянной палочкой.

1.9. Определение гематокритной величины

Гематокритное число – это отношение объема эритроцитов к общему объему крови, выраженное в литрах на литр (1 л/л равен 100 %).

Подготовка к исследованию. Приготовление растворов антикоагулянта: - раствор Геллера и Пауля: на 100 мл воды щавелевокислого аммония – 1,2 г, щаве- левокислого калия – 0,8 г;

- 5 % раствор трехзамещенного лимоннокислого натрия. Оборудование и реактивы: микрокапилляры; центрифуга (при массовом отборе проб удобнее использовать специальную центрифугу МГЦ-8); растворы антикоагулянтов: раствор гепарина 1000 Ед/мл, или 7,7 мг/мл, или раствор Геллера и Пауля, или 5 % рас- твор лимоннокислого натрия.

Методика определения и учет результатов. Микрокапилляры предварительно об- рабатывают одним из растворов антикоагулянта: несколько раз споласкивают их раство- ром гепарина и высушивают при комнатной температуре или же в капилляры насасыва- ют на 1/10 часть раствора Геллера и Пауля и высушивают в сушильном шкафу при температуре 60 °С. В подготовленные таким образом капилляры набирают кровь. Конец ка- пилляра закупоривают с помощью замазки и ставят центрифугировать до получения постоянного объема эритроцитов. Время центрифугирования зависит от скорости вра- щения центрифуги. Достигают эффекта полного осаждения эритроцитов. Отсчет объема эритроцитов и плазмы производят с помощью миллиметровой линейки. Процентное отношение столба эритроцитов к высоте всего столба крови является гематокритной величиной, его переводят в размерность литр на литр.

1.10. Определение скорости оседания эритроцитов

В зависимости от физических и химических свойств крови эритроциты оседают в микрокапиллярах с различной скоростью. Скорость оседания эритроцитов определяется в аппаратах Панченкова и выражается в миллиметрах за 1 ч (мм/ч).

Оборудование и реактивы: часовое стекло; аппарат Панченкова, состоящий из шта- тива и специальных капиллярных пипеток, на которых нанесена миллиметровая шкала длиной К (см), верхнее деление шкалы отмечено буквами О и К (кровь), против деления 50 имеется буква Р (реактив); профильтрованный 5 % раствор трехзамещенного лимонно- кислого натрия.

Методика определения и учет результатов. Промывают капиллярную пипетку рас- твором лимоннокислого натрия, затем набирают этот раствор до метки Р и выливают его на часовое стекло. Тем же капилляром набирают кровь два раза до метки К и спускают на часовое стекло. Хорошо перемешивают и, набрав смесь в капилляр до метки К, ставят в штатив на 1 ч. По истечении этого времени определяют скорость оседания эритроци- тов. Величину столбика плазмы, освободившегося от эритроцитов, учитывают по деле- ниям на капиллярной пипетке.

При работе с молодью рыб допускается набирать меньший объем крови (1/2 или 1/4 К), при этом соотношение лимоннокислого натрия и крови необходимо строго сохранять на уровне 1:2.

 1.11. Биохимические исследования крови

Подготовка крови к исследованию. Для биохимического исследования используется сыворотка крови. Для получения сыворотки кровь из шприца после ее забора пере- ливают в пробирку. При этом необходимо кровь из шприца переливать медленно по стенке пробирки для предотвращения гемолиза, т. е. разрушения эритроцитов (рис. 10). После помещения крови в пробирку ее маркируют.

Далее кровь необходимо подвергнуть центрифугированию. После центрифугирова- ния сыворотка оказывается сверху, эритроцитарная масса – снизу (рис. 11). Пробирку из центрифуги следует вынимать крайне осторожно во избежание взмучивания эритроци- тарной массы (рис. 12). Сыворотку откачивают из пробирки шприцем с иглой или с помощью дозатора (рис. 13). Захват эритроцитов при этом недопустим, так как при био- химическом исследовании будут получены искаженные данные (рис. 14).

После получения сыворотку подвергают исследованию при наличии биохимической лаборатории. При ее отсутствии сыворотку замораживают, затем отправляют в лабора- торию для исследования. Размораживание сыворотки в процессе транспортировки недопустимо.

Рис. 10. Помещение крови в пробирку

Рис. 11. Вид крови после центрифугирования

Рис. 12. Извлечение пробирки из центрифуги

Рис. 13. Откачивание сыворотки крови

Рис. 14 Внешний вид сыворотки пригодной для исследования

Интенсивность метаболических реакций в организме оценивают по показателям белкового (общий белок, альбумины), липидного (общие липиды, холестерин), углевод- ного (глюкоза) и минерального обмена (концентрация кальция и неорганического фосфора), а также по содержанию ферментов переаминирования (АСТ, АЛТ). Исследо- вание показателей проводят в сыворотке крови фотометрическими методами с исполь- зованием биохимических наборов. Определяют показатели согласно инструкциям, прилагаемым к наборам.

1.11.1. Исследование показателей белкового обмена

Общий белок сыворотки крови определяется биуретовой реакцией. Метод основан на том, что белки реагируют в щелочной реакции с сернокислой медью с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски которых пропор- циональна содержанию общего белка в сыворотке крови.

Определение содержания альбумина в сыворотке крови осуществляется по реакции с бромкрезоловым зеленым. Альбумин в слабокислой среде образует с бромкрезоловым зеленым окрашенное комплексное соединение. Интенсивность окраски определяется фотометрически и пропорциональна содержанию альбумина в сыворотке крови.

1.11.2. Исследование показателей углеводного обмена

Концентрация глюкозы в крови определяется ферментным методом. Метод основан на окислении глюкозы кислородом воздуха при каталитическом действии глюкозоокси- дазы с образованием перекиси водорода и γ-глюконолактона. Образовавшуюся перекись водорода определяют по индофеноловой реакции аминоантипирина с хромогеном, ката- лизируемой пероксидазой. Интенсивность окраски раствора при соблюдении рабочих условий пропорциональна содержанию глюкозы.

1.11.3. Исследование показателей липидного обмена

Определение общих липидов в сыворотке крови проводится по методу, основанному на взаимодействии между продуктами распада липидов, образовавшимися после гидро- лиза сыворотки серной кислотой, с сульфофосфованилиновым реактивом с образованием окрашенного соединения. Интенсивность окраски раствора пропорциональна содер- жанию общих липидов.

Определение содержания общего холестерина в сыворотке крови проводится по ме- тоду, основанному на образовании окрашенного в зеленый цвет раствора при реакции холестерола со смесью уксусной и серной кислот в присутствии уксусного ангидрида.

1.11.4. Исследование показателей минерального обмена

Определение общего кальция в сыворотке крови проводится комплексометричес- ким методом по Уилкинсону. Мурексид при рН 10–13 образует с кальцием соединение розового цвета. При добавлении Трилона Б последний образует с кальцием более проч- ное комплексное соединение и Мурексид освобождается с восстановлением в точке эквивалентности первоначального фиолетового цвета.

Неорганический фосфор в безбелковом фильтрате крови определяется по реакции с ванадат-молибдатовым реактивом (по Пулсу, в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой). В результате данной реакции образуется раствор лимонно-желтого цвета, интенсивность которого пропорциональна количеству фосфора в пробе.

1.11.5. Определение печеночных аминотрансфераз

Содержание аминотрансфераз (аланинаминотрансфераза (АЛТ) аспартатаминотранс- фераза (АСТ)) в сыворотке крови определяют методом Райтмана – Френкеля. В резуль- тате переаминирования, происходящего под действием АСТ и АЛТ, образуется щавелево- уксусная и пировиноградная кислоты. Щавелевоуксусная кислота в процессе фермент- ной реакции превращается в пировиноградную кислоту. При добавлении 2,4-динитро- фенилгидразина в щелочной среде образуется окрашенный гидразон пировиноградной кислоты, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты.

2. Результаты исследования

Необходимым условием успешного ведения интенсивного рыбоводства и воспроиз- водства ценных видов рыб является тщательный контроль за физиологическим состоя- нием объектов выращивания. Кровь, как наиболее лабильная ткань, быстро реагирует на действие различных факторов и приводит к восстановлению равновесия между организ- мом и средой. Поэтому для ранней диагностики заболеваний, в том числе и незаразных, наряду с паразитологическими, микробиологическими и вирусологическими исследова- ниями важное значение имеет анализ крови. 

2.1. Результаты гематологических исследований молоди радужной форели в установке замкнутого водоснабжения

Одним из важнейших тестов при характеристике вида являются данные об особен- ностях крови – наиболее доступной для исследования жидкой ткани, испытывающей на себе воздействие как внешних, так и внутренних факторов, ткани, которая в значитель- ной степени характеризует благополучие организма как единого. Именно на основании изучения особенностей крови можно сделать заключение об уровне оптимальности ис- кусственных условий, в которых выращивается рыба, содержатся производители.

Кровь, являясь внутренней средой организма, быстро и точно реагирует на измене- ния окружающей среды, всегда безошибочно отражает физиологическое состояние орга- низма, свидетельствуя о характере и тяжести отклонения от нормы. Исследования крови рыб, находившихся в естественных и искусственных условиях, позволяют установить гематологическую норму их, а значит, выяснить степень отклонений от нормы и харак- тер гематологических адаптаций.

В процессе изучения мазков крови были получены нижеописанные данные. У рыб основным отличием эритроцитов в сравнении с млекопитающими является наличие ядра, в то время как у млекопитающих зрелые эритроциты не имеют ядра. В окрашен- ных мазках крови эритроциты имеют синюю окраску и овальную форму. Ядро эритро- цитов окрашивается ярче, чем цитоплазма (рис. 15).

Рис. 15. Эритроциты радужной форели

Основными представителями клеток лейкоцитов у рыб являются гранулоциты, лим- фоциты, моноциты.

Гранулоциты. Эти клетки имеют характерную структуру, и их иногда называют полиморфно-ядерными лейкоцитами (PMN). В цитоплазме их содержатся многочислен- ные мелкие гранулы. Гранулоциты относятся к различным подгруппам клеток в зависи- мости от их окраски в мазках крови. У рыб гранулоциты делятся на три типа: нейтрофилы и эозинофилы являются наиболее распространенными, в то время как базофилы встречаются гораздо реже. Считается, что базофильные гранулоциты отсутствуют у лососевых.

Гранулоциты могут составлять 4–60 % лейкоцитов у рыб, и существует значитель- ная разница в численности гранулоцитов, присутствующих в крови различных видов рыб.

Основным идентификационным признаком гранулоцитов является ядро, смещенное к краю цитоплазмы и занимающее значительное пространство. Также для гранулоцитов характерно наличие в ядре и цитоплазме включений – гранул (рис. 16).

Рис. 16. Гранулоцит

Лимфоциты. Лимфоциты являются большими округлыми клетками, ядро занимает почти всю цитоплазму. Зрелые лимфоциты окрашиваются в синий цвет, незрелые – в фиолетовый (рис. 17). Среди белых клеток крови составляют большинство, образуя лимфоцитарный профиль.

Рис. 17. Зрелый (слева) и незрелый (справа) лимфоциты

Моноциты. Моноциты – крупные клетки с большим ядром, занимающим от одной трети до половины клетки. Основными идентификационными признаками являются на- личие в цитоплазматической мембране выступов и овальная форма клетки (рис. 18).

Рис. 18. Моноцит

Тромбоциты. Различают четыре морфологические формы тромбоцитов: - овальный (рис. 19, а);

- веретенообразный (рис. 19, б); - с шипами (рис. 19, в); - фрагментированный (рис. 19, г).

Рис. 19. Тромбоциты: а – овальный; б – веретенообразный; в – с шипами; г – фрагментированный

Овальные или веретенообразные клетки представляют собой нормальные формы тромбоцитов в естественных условиях, их легко спутать с лимфоцитами, потому что они очень похожи.

Основным гематологическим показателем является формула крови, которая отража- ет процентное и количественное соотношение различных клеток крови. Лейкоцитарная формула отражает процентный состав клеток белой крови.

При изучении мазков крови молоди радужной форели (средней массой 50 г) были получены следующие данные по формуле крови (табл. 1).

Таблица 1. Формулы крови радужной форели

2.2. Результаты биохимических исследований молоди радужной форели в установке замкнутого водоснабжения

В настоящее время в литературе описано большое количество исследований, в кото- рых физиологическое состояние рыб оценивается с помощью гематологических показа- телей – клеточного и химического состава крови. Данные методики обладают информа- ционной ценностью и начинают применяться в различных программах мониторинга фи- зиологического состояния рыбы. Нами был проведен биохимический анализ сыворотки крови рыбопосадочного материала радужной форели. Все данные представлены в табл. 2, 3.

Таблица 2. Активность ферментов сыворотки крови молоди радужной форели

Примечание: СК – креатиназа; HBDH –гидроксибутиратдегидрогеназа; ALT – аланинаминотрансфераза; AST – аспартатаминотрансфераза; LDH – лактатдегидрогена- за; ALP – щелочная фосфатаза.

Таблица 3. Концентрации основных параметров сыворотки крови молоди радужной форели

Примечание: Chol – холестерин; P – фосфор; Glukoza – глюкоза; Ca – кальций; TG – триглицериды; Alb – альбумин; MG – магний; UREA – мочевина; TP – полный белок.